Что означает chlamydia trachomatis днк
Что означает chlamydia trachomatis днк
Исследование для выявления возбудителя урогенитального хламидиоза (Chlamydia trachomatis), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) хламидий в образце биоматериала.
Хламидия, возбудитель хламидиоза.
Синонимы английские
Ch. trachomatis, DNA (qPCR, Real-time PCR, RT-PCR), Chlamydia trachomatis by Amplified Detection.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Отделяемое конъюнктивы, секрет простаты, первую порцию утренней мочи, соскоб из прямой кишки, синовиальную жидкость, соскоб урогенитальный, эякулят, мазок из зева (ротоглотки).
Общая информация об исследовании
Chlamydia trachomatis (хламидия трахоматис) – бактерия, внутриклеточный паразит, возбудитель нескольких заболеваний человека. В частности, некоторые серовары этого вида вызывают трахому и венерическую лимфогранулему. В России наиболее распространена хламидийная инфекция мочеполовой системы (урогенитальный хламидиоз). Она передается половым путем, а также от матери к ребенку при родах. Возможен и контактно-бытовой путь передачи. Chlamydia trachomatis – самый частый возбудитель негонококкового уретрита. У женщин хламидиоз встречается чаще, чем у мужчин.
Инкубационный период составляет от 2 недель до 1 месяца. Часто (примерно в половине случаев) хламидиоз протекает бессимптомно.
Начальные симптомы инфекции: жжение и боль при мочеиспускании, слизистые выделения, помутнение мочи, слабость, немного повышенная температура, у мужчин – воспаление мочеиспускательного канала, которое длится долгое время, у женщин – слизистые или гнойные выделения из влагалища. В дальнейшем могут возникать различные осложнения: эпидидимит, эндометрит, конъюнктивит, артрит и др.
Считается, что хламидийная инфекция опасна при беременности, так как может привести к преждевременным родам, выкидышу, сниженному весу новорождённых и даже гибели плода.
Кроме того, новорождённый ребенок иногда заражается хламидиозом от матери при прохождении через родовой канал, из-за чего у него развивается конъюнктивит либо пневмония.
Для анализа на хламидии и диагностики хламидиоза применяют серологические методы (например, ИФА), посев хламидий, а также выявление ДНК бактерий (например, ПЦР).
У серологических методов и посева есть ряд ограничений, так что тесты на основе ПЦР считаются самыми удобными и чувствительными.
ПЦР в реальном времени (РТ-ПЦР) – это лабораторный метод, который позволяет найти в пробе ДНК возбудителя: если в образце присутствует Chlamydia trachomatis, то реал-тайм ПЦР обнаружит ДНК этой бактерии. Принцип заключается в том, что ДНК возбудителя, которого хотят выявить, много раз копируется с помощью специальных ферментов (ДНК-полимераз). Обычно проходит несколько десятков циклов и в ходе каждого нужная ДНК удваивается. В результате количество исследуемой ДНК увеличивается в миллионы раз и ее можно детектировать с помощью флуоресцентного красителя.
При ПЦР в реальном времени количество ДНК выявляется в процессе копирования, после каждого цикла. Но при этом с помощью РТ-ПЦР нельзя различить формы инфекции (например, свежеприобретенное или давнее заражение).
Для чего используется ПЦР-анализ на хламидии?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Референсные значения: отрицательно.
Кто назначает исследование?
Врач общей практики, терапевт, инфекционист, гинеколог.
Что означает chlamydia trachomatis днк
Антитела класса IgM к возбудителю урогенитального хламидиоза (Chlamydia trachomatis) – специфические иммуноглобулины, вырабатывающиеся в организме человека в первую очередь после инфицирования возбудителем. Они являются ранним серологическим маркером данной инфекции.
Антитела класса IgМ к Chlamydia trachomatis, иммуноглобулины класса М к возбудителю хламидиоза
Anti-Chlamydia tr.-IgМ, Chlamydia tr. Antibodies, IgМ.
Иммуноферментный анализ (ИФА).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Chlamydia trachomatis, IgМ, – это антитела (иммуноглобулины, факторы иммунитета), которые вырабатываются при хламидийной инфекции в острый период ее развития.
Хламидийная инфекция, или хламидиоз, – это совокупность заболеваний, которые вызываются микроорганизмами из рода хламидия.
Хламидии – это разновидность бактерий. Их особенностью является то, что в процессе своего эволюционного развития они утратили ряд функций обмена веществ, необходимых для самостоятельной жизнедеятельности, и могут размножаться только внутри других биологических клеток. В связи с этим они классифицируются как внутриклеточные паразиты.
Жизненный цикл хламидий состоит из двух фаз. Первая фаза – внеклеточная, когда хламидии находятся в спороподобной форме и называются элементарными тельцами (они нечувствительны к антибиотикам). После проникновения внутрь клетки хламидии превращаются в ретикулярные тельца – биологическую форму, которая активно размножается; в этот период хламидии чувствительны к антибактериальной терапии. Такая особенность объясняет склонность данного вида инфекции к длительному хроническому течению.
Заболевания у человека вызывает четыре вида хламидий, одним из них является Chlamydia trachomatis. Этот вид имеет несколько разновидностей (серотипов), каждый из которых склонен к поражению того или иного органа. Chlamydia trachomatis инфицирует определенные виды клеток, покрывающие слизистую оболочку мочеиспускательного канала, внутреннюю поверхность шейки матки у женщин, заднюю стенку глотки, слизистую оболочку прямой кишки, конъюнктивы глаз, а также дыхательных путей у детей в первые месяцы их жизни.
Инфицирование хламидиями происходит в результате прямого контакта слизистых оболочек с возбудителем, обычно во время незащищенного полового акта. Новорождённые могут заражаться во время прохождения родовых путей.
Инкубационный период от момента заражения до появления первых симптомов заболевания продолжается от 7 до 20 дней и более. Иногда видимые признаки не развиваются. Это или бессимптомное носительство, или случаи, когда симптомы заболевания незаметны, но при этом структуры и функции тканей медленно нарушаются (персистирующая форма заболевания).
У женщин хламидийная инфекция чаще всего протекает в виде воспаления канала шейки матки, откуда оно переходит в полость матки и маточные трубы. Воспаление маточных труб (сальпингит) является самым распространенным осложнением хламидиоза и может приводить к непроходимости маточных труб и в итоге к бесплодию или трубной (внематочной) беременности. Особенностью хламидиоза придатков матки является склонность к отсутствию специфических симптомов болезни и длительное течение. В некоторых случаях инфекция распространяется выше, на органы брюшной полости.
У мужчин хламидиоз может присутствовать как воспаление мочеиспускательного канала (уретрит), семявыводящих протоков (эпидидимит). В некоторых случаях происходит воспаление предстательной железы (простатит).
От 5 до 20 % беременных женщин имеют хламидийную инфекцию канала шейки матки. Примерно половина детей, которые рождаются у них, инфицируется во время родов. У половины из инфицированных детей развивается хламидийный конъюнктивит, 10 % заболевает воспалением легких.
При половых контактах хламидийная инфекция может вызывать острое воспалительное заболевание – венерическую лимфогранулему. По мере развития заболевания увеличиваются лимфатические узлы и нарушается самочувствие. В дальнейшем возможны осложнения, связанные с изменениями в половых органах и прямой кишке.
Инфицирование хламидиями сопровождается появлением в организме антител (иммуноглобулинов): IgМ, IgA, IgG. Продукция каждого из них связана с определенной стадией инфекционного процесса, так что по их появлению и количеству в крови можно судить о стадии заболевания.
Антитела класса IgМ появляются на самом начальном этапе (через 5 дней с момента инфицирования), раньше других иммуноглобулинов. Наличие IgМ при отсутствии других видов антител (IgA, IgG) указывает на первичное инфицирование хламидиями, которое произошло не более 2 недель назад. Особую ценность это свойство IgМ имеет при диагностике хламидиоза у новорождённых детей, так как антитела этого вида проникают через плацентарный барьер в организм ребенка из крови матери. Это означает, что IgМ могут появиться в организме ребенка только в результате начала активного инфекционного процесса. Через 2-3 месяца с момента инфицирования антитела IgМ исчезают из кровотока независимо от того, проводится ли терапия заболевания или нет. Таким образом, отсутствие IgМ на фоне высокой концентрации IgA и IgG указывает на то, что заболевание протекает более 2-3 месяцев.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Результаты анализа говорят о наличии или отсутствии острого инфекционного процесса, времени его возникновения/рецидива, а также о том, является ли заболевание следствием первичного инфицирования или обострением хронической патологии.
Причины положительного результата:
Причины отрицательного результата:
Кто назначает исследование?
Врач общей практики, терапевт, акушер-гинеколог, педиатр, неонатолог, инфекционист.
Chlamydia trachomatis, IgA, титр
Антитела класса IgA к возбудителю урогенитального хламидиоза (Chlamydia trachomatis) – специфические иммуноглобулины, вырабатывающиеся в организме человека в период выраженных клинических проявлений урогенитального хламидиоза. Они являются серологическим маркером этого заболевания.
Антитела класса IgА к Chlamydia trachomatis, иммуноглобулины класса А к возбудителю хламидиоза.
Anti-Chlamydia tr.-IgA, Chlamydia tr. Antibodies, IgA.
Иммуноферментный анализ (ИФА).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.
Общая информация об исследовании
Chlamydia trachomatis, IgA, – это антитела (иммуноглобулины, факторы иммунитета), которые вырабатываются при хламидийной инфекции в острый период ее развития.
Хламидийная инфекция, или хламидиоз, – это совокупность заболеваний, которые вызываются микроорганизмами из рода хламидия.
Хламидии – это разновидность бактерий. Их особенностью является то, что в процессе своего эволюционного развития они утратили ряд функций обмена веществ, необходимых для самостоятельной жизнедеятельности, и могут размножаться только внутри других клеток. В связи с этим они классифицируются как внутриклеточные паразиты.
Жизненный цикл хламидий состоит из двух фаз. Первая фаза – внеклеточная, когда хламидии находятся в спороподобной форме и называются элементарными тельцами (они нечувствительны к антибиотикам). После проникновения внутрь клетки хламидии превращаются в ретикулярные тельца – биологическую форму, которая активно размножается; в этот период хламидии чувствительны к антибактериальной терапии. Такая особенность объясняет склонность данного вида инфекции к длительному хроническому течению.
Заболевания у человека вызывают четыре вида хламидий, одним из них является Chlamydia trachomatis. Этот вид имеет несколько разновидностей (серотипов), каждый из которых склонен к поражению того или иного органа. Chlamydia trachomatis инфицирует определенные виды клеток, покрывающие слизистую оболочку мочеиспускательного канала, внутреннюю поверхность шейки матки у женщин, заднюю стенку глотки, слизистую оболочку прямой кишки, конъюнктивы глаз, а также дыхательных путей у детей в первые месяцы их жизни.
Инфицирование хламидиями происходит в результате прямого контакта слизистых оболочек с возбудителем, обычно во время незащищенного полового акта. Ребенок может заразиться во время прохождения родовых путей.
Инкубационный период от момента заражения до появления первых симптомов заболевания продолжается от 7 до 20 дней и более. Иногда видимые признаки не развиваются. Это или бессимптомное носительство, или случаи, когда симптомы заболевания незаметны, но при этом структуры и функции тканей медленно нарушаются (персистирующая форма заболевания).
У женщин хламидийная инфекция чаще всего протекает в виде воспаления канала шейки матки, откуда оно переходит в полость матки и маточные трубы. Воспаление маточных труб (сальпингит) является самым распространенным осложнением хламидиоза и может приводить к непроходимости маточных труб и в итоге к бесплодию или трубной (внематочной) беременности. Особенностью хламидиоза придатков матки является склонность к отсутствию специфических симптомов болезни и длительное течение. В некоторых случаях инфекция распространяется выше, на органы брюшной полости.
У мужчин хламидиоз может присутствовать как воспаление мочеиспускательного канала (уретрит), семявыводящих протоков (эпидидимит). В некоторых случаях воспаляется предстательная железа (простатит).
От 5 до 20 % беременных женщин имеют хламидийную инфекцию канала шейки матки. Примерно половина детей, которые рождаются у них, инфицируется во время родов. У половины из инфицированных детей развивается хламидийный конъюнктивит, 10 % детей заболевает воспалением легких.
При половых контактах хламидийная инфекция может вызывать острое воспалительное заболевание – венерическую лимфогранулему. По мере развития заболевания увеличиваются лимфатические узлы и нарушается самочувствие. В дальнейшем могут возникать осложнения, связанные с изменениями в половых органах и прямой кишке.
Инфицирование хламидиями сопровождается появлением в организме антител (иммуноглобулинов): IgМ, IgA, IgG. Продукция каждого из них связана с определенной стадией инфекционного процесса, так что по их появлению и количеству в крови можно судить о стадии заболевания.
Антитела класса IgA служат показателями острой или обострения хронической инфекции. Они обеспечивают местный иммунитет в слизистых оболочках, где наблюдается их максимальная концентрация. Это препятствует более широкому распространению хламидий в организме. IgA выявляются в крови через 10-15 дней после первичного внедрения Chlamydia trachomatis. В дальнейшем, по истечении определенного времени, их концентрация снижается. Если заболевание приобретает хроническую форму, их уровень остается высоким на протяжении длительного времени. Титр lgA увеличивается при обострении хронического процесса или при повторном заражении, но снижается после эффективной терапии.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
КП (коэффициент позитивности): 0 — 0,99.
Титр определяется при получении положительного результата исследования и должен использоваться исключительно для оценки результатов исследования в динамике (при проведении повторного обследования через 2-4 недели), но не для постановки диагноза по единичному результату анализа.
Результаты анализа говорят о наличии или отсутствии острого инфекционного процесса, вызванного хламидиями, без уточнения того, произошло ли инфицирование недавно или же это обострение хронического заболевания.
Что может влиять на результат?
Отрицательный результат анализа может быть получен, если прошло менее двух недель от начала инфекционного процесса.
Кто назначает исследование?
Акушер-гинеколог, уролог, педиатр, неонатолог, инфекционист, врач общей практики, терапевт.
Литература
Подписка на новости
Оставьте ваш E-mail и получайте новости, а также эксклюзивные предложения от лаборатории KDLmed
Что означает chlamydia trachomatis днк
Антитела класса IgG к возбудителю урогенитального хламидиоза (Chlamydia trachomatis) – специфические иммуноглобулины, вырабатывающиеся в организме человека в период выраженных клинических проявлений урогенитального хламидиоза. Они являются серологическим маркером этого заболевания, а также маркером перенесенной в недавнем прошлом инфекции.
Антитела класса IgG к Chlamydia trachomatis, иммуноглобулины класса G к возбудителю хламидиоза.
Anti-Chlamydia tr.-IgG, Chlamydia tr. Antibodies, IgG.
Иммуноферментный анализ (ИФА).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Chlamydia trachomatis, IgG, – это антитела (иммуноглобулины, факторы иммунитета), которые вырабатываются при хламидийной инфекции.
Хламидийная инфекция, или хламидиоз, – это совокупность заболеваний, которые вызываются микроорганизмами из рода хламидия.
Хламидии – разновидность бактерий. Их особенностью является то, что в процессе своего эволюционного развития они утратили ряд функций обмена веществ, необходимых для самостоятельной жизнедеятельности, и могут размножаться только внутри других биологических клеток. В связи с этим они классифицируются как внутриклеточные паразиты.
Жизненный цикл хламидий состоит из двух фаз. Первая фаза – внеклеточная, когда хламидии находятся в спороподобной форме и называются элементарными тельцами (они нечувствительны к антибиотикам). После проникновения внутрь клетки хламидии превращаются в ретикулярные тельца – биологическую форму, которая активно размножается; в этот период хламидии чувствительны к антибактериальной терапии. Такая особенность объясняет склонность данного вида инфекции к длительному хроническому течению.
Заболевания у человека вызывает четыре вида хламидий, одним из них является Chlamydia trachomatis. Этот вид имеет несколько разновидностей (серотипов), каждый из которых склонен к поражению того или иного органа. Chlamydia trachomatis инфицирует определенные виды клеток, покрывающие слизистую оболочку мочеиспускательного канала, внутреннюю поверхность шейки матки у женщин, заднюю стенку глотки, слизистую оболочку прямой кишки, конъюнктивы глаз, а также дыхательных путей у детей в первые месяцы их жизни.
Инфицирование хламидиями происходит в результате прямого контакта слизистых оболочек с возбудителем, обычно во время незащищенного полового акта. Новорождённые могут заражаться во время прохождения родовых путей.
Инкубационный период от момента заражения до появления первых симптомов заболевания продолжается от 7 до 20 дней и более. Иногда видимые признаки не развиваются. Это или бессимптомное носительство, или случаи, когда симптомы заболевания незаметны, но при этом структуры и функции тканей медленно нарушаются (персистирующая форма заболевания).
У женщин хламидийная инфекция чаще всего протекает в виде воспаления канала шейки матки, откуда оно переходит в полость матки и маточные трубы. Воспаление маточных труб (сальпингит) является самым распространенным осложнением хламидиоза и может приводить к непроходимости маточных труб и в итоге к бесплодию или трубной (внематочной) беременности. Особенность хламидиоза придатков матки заключается в склонности к отсутствию специфических симптомов болезни и длительному течению. В некоторых случаях инфекция распространяется выше, на органы брюшной полости.
У мужчин хламидиоз может присутствовать как воспаление мочеиспускательного канала (уретрит), семявыводящих протоков (эпидидимит). Иногда происходит воспаление предстательной железы (простатит).
От 5 до 20 % беременных женщин имеют хламидийную инфекцию канала шейки матки. Примерно половина детей, которые рождаются у них, инфицируется во время родов. У половины из инфицированных детей развивается хламидийный конъюнктивит, 10 % заболевает воспалением легких.
При половых контактах хламидийная инфекция может вызывать острое воспалительное заболевание – венерическую лимфогранулему. По мере развития заболевания увеличиваются лимфатические узлы и нарушается самочувствие. В дальнейшем возможны осложнения, связанные с изменениями в половых органах и прямой кишке.
Инфицирование хламидиями сопровождается производством в организме антител (иммуноглобулинов): IgМ, IgA, IgG. Продукция каждого из них связана с определенной стадией инфекционного процесса, так что по их появлению и количеству в крови можно судить о стадии заболевания.
Антитела класса IgG возникают через 3-4 недели с момента первичного инфицирования хламидиями и в дальнейшем продолжают выявляться на протяжении всего заболевания, а также в течение продолжительного времени после выздоровления. Таким образом, положительный результат теста на IgG свидетельствует о том, что инфицирование хламидиями произошло не менее 3-4 недель назад.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
0,9 Причины положительного результата:
Причины отрицательного результата:
Кто назначает исследование?
Врач общей практики, терапевт, акушер-гинеколог, педиатр, неонатолог, инфекционист.
Что означает chlamydia trachomatis днк
Современные представления о возбудителе
Серодиагностка
Современные представления о возбудителе
Хламидиозы — группа инфекционных заболеваний антропонозной и зоонозной природы, вызывающих широкий спектр разнообразной патологии более чем у полумиллиарда человек по всему миру (рис. 1).
По оценке ВОЗ, среди заболеваний, передающихся половым путем, урогенитальный хламидиоз занимает второе место по частоте после трихомонадных инфекций. Более 90 миллионов новых случаев инфицирования С. trachomatis происходит ежегодно в мире, а экономический ущерб составляет миллиарды долларов [11, 12, 13, 25]. Россия не является исключением. Ежегодно сотни тысяч новых случаев заболевания, вызванных данным видом хламидий, регистрируются в Российской Федерации, в то же время многие случаи остаются нераспознанными из-за неполноценной диагностики, а в ряде случаев — при использовании некачественных диагностикумов.
Chlamydia trachomatis — облигатные внутриклеточные грамотрицательные неподвижные бактерии — причина трахомы, болезней, передающихся половым путем, некоторых форм артритов, конъюктивитов и пневмоний у новорожденных. Кроме того, инфицирование С. trachomatis увеличивает риск проникновения ВИЧ-инфекции [4].
Рис. 1. Местная хламидийная колонизация слизистых.
Хламидии метаболически неактивны по своей способности синтезировать АТФ и для жизнедеятельности используют экзогенные источники энергии. Они обладают уникальным двустадийным (бифазным) циклом развития: инфекционная форма (элементарные тельца) путем эндоцитоза попадает в эукариотические клетки, в которых остается в виде цитоплазматических включений, трансформируясь в вегетативную форму (репродуктивные тельца) и размножаясь путем бинарного деления [10]. При благоприятных условиях репродуктивный цикл завершается в течение 48-72 часов.
Рис. 2. Цикл размножения хламидий. 
При наличии неблагоприятных для хламидий факторов этот период развития может достаточно растянуться (рис. 2).
Таксономическая классификация хламидий основывается на ограниченных фенотипических, морфологических и генетических критериях. Она не учитывает современных достижений в области генетики хламидий, таких как полный сиквенс генома С. trachomatis, анализ рибосомального оперона и открытие облигатных внутриклеточных микроорганизмов, имеющих схожий с хламидиями цикл развития. Фундаментальные исследования в области систематики хламидий [1, 27, 28], позволили уточнить таксономическое положение ряда представителей порядка Chlamydiales и предложить новую классификацию хламидий.
Таблица 1. Современная классификация хламидий.
Из данных, представленных в таблице 1, видно, что были внесены поправки в семейство Chlamydiaceae, которое теперь включает два рода: собственно Chlamydia и новый род Chlamydophila; в последний перешли виды Chlamydia pecorum, Chlamydia pneumonia и Chlamydia psittaci. Род Chlamydia включает, кроме Chlamydia trachomatis, два новых вида: Chlamydia muridarum и Chlamydia suis. Chlamydia muridarum изолирован от мышей и золотистых хомячков [3,4], Chlamydia suis — от свиней [5].
Хламидийные виды продуцируют гликоген, который легко детектируется в человеческих сероварах С. trachomatis и в различных количествах — в С. muridarum и С. suis [6]. Штаммы, входящие в данный род, имеют различия в морфологии включений и в уровнях чувствительности к сульфадиазину.
Выраженный полиморфизм клинических проявлений значительно осложняет клиническую диагностику хламидиозов. Решающее значение в выявлении хламидийных инфекций принадлежит методам лабораторной диагностики, которые включают в себя и данные серологии (обнаружение различных классов антихламидийных антител). В то же время необходимо учитывать, что серологические методы имеют второстепенное значение в диагностике острой хламидийной инфекции из-за невысоких уровней антихламидийных антител. Но они успешно используются при тяжелых воспалительных заболеваниях урогенитальной сферы, в установлении диагноза персистирующей, бессимптомной, вялотекущей инфекции или хронических последствий заболеваний, вызванных С. trachomatis (осложнений, возникающих в результате восходящей инфекции), когда другие методы лабораторной диагностики неэффективны и не позволяют выявить антигены, или ДНК С. trachomatis, или живые микроорганизмы [12, 18]. В таких случаях серологический анализ дает исчерпывающий ответ, снижая возможность ложной интерпретации отрицательных результатов лабораторного анализа при прямом определении антигена или ДНК. Данный метод уменьшает необходимость использования инвазивных процедур, которые требуются для прямого детектирования антигена, ДНК/РНК возбудителя, и, соответственно, проблемы, связанные с техникой взятия образца (эффективности соскоба) и его транспортировки. Использование серологических методов исследования наиболее актуально при лабораторном обследовании больных с воспалительными заболеваниями органов малого таза (ВЗОМТ), так как серодиагностика более часто выявляет наличие инфекционного процесса, вызванного С. trachomatis, по сравнению с ПЦР или культуральным методом при использовании образцов, полученных из шейки матки и уретры.
Наличие видоспецифических антихламидийных антител пятикратно повышает риск возникновения внематочной беременности [32]. Исследования наличия МОМР-белка С. trachomatis в тканевых образцах маточных труб у бесплодных женщин с гистологически подтвержденным хроническим сальпингитом и/или трубной непроходимостью показали, что уровень видоспецифических антител класса G к С. trachomatis значительно выше у пациентов, у которых специфический антиген был обнаружен, чем в случаях, когда он не выявлялся. Распространение и уровни антител класса А отмечены на более высоких значениях при ВЗОМТ, чем у пациентов с бесплодием, обусловленным трубной непроходимостью. Это может свидетельствовать о более остром течении хламидийной инфекции у пациентов с ВЗОМТ. Кроме того, отмечены более высокие уровни видоспецифических антител класса G у пациентов с бесплодием, вызванным трубной непроходимостью, чем у пациентов с другим генезом бесплодия [21,34], а также у больных реактивными артритами [15]. Антитела к возбудителю определяются более чем у 50% женщин с обтурацией маточных труб. Необходимо учитывать, что более 50% случаев воспаления придатков вызвано С. trachomatis [26].
Все это свидетельствует о предпочтительности проведения серологического исследования у больных с воспалительными заболеваниями органов малого таза [16,20]. Видоспецифическая диагностика антител к С. trachomatis применяется для исключения хронической формы этой инфекции у женщин с ВЗОМТ и бесплодием. Не менее важна она для установления причин реактивного артрита [30]. Определение IgG к МОМР-белку в синовиальной жидкости успешно используется для диагностики реактивного артрита, вызванного С. trachomatis [15].
Современным направлением в лабораторной диагностике инфекций, вызванных С. trachomatis, становится комплексный подход при использовании комбинации различных диагностических тестов для скрининга и подтверждения. Серологическое исследование посредством определения видоспецифических антител к С. trachomatis является достаточно эффективным методом диагностики, особенно при инфекциях верхних отделов урогенитального тракта. Метод позволяет охарактеризовать присутствие инфекции, ее стадию и назначить соответствующее лечение.
Характеристика гуморального ответа
Иммунологический ответ при хламидиозах еще недостаточно изучен. Известно, что развитие хламидийной инфекции активирует защитные механизмы организма человека: индукция секреторного IgA, цитотоксическое действие Т-клеток и гуморальный ответ путем выработки различных классов антител. Последовательная динамика появления различных классов антител — М, A, G — позволяет поставить точный серологический диагноз хламидийной инфекции.
Наработка антител к антигенам хламидий происходит на стадии элементарных телец, когда хламидийные клетки находятся в межклеточном пространстве и доступны для контакта с иммунокомпетентными клетками организма. Хламидии поглощаются периферическими моноцитами, распространяются и оседают в различных органах и тканях организма человека, сохраняясь там в течение длительного периода времени, что, как правило, приводит к развитию восходящей персистирующей формы инфекции, которая обуславливает хроническое течение болезни. При этом время от времени происходит высвобождение антигенов хламидий из клеток, что приводит к индуцированию гуморального ответа. Известно, что возбудитель или его антигенные или нуклеиновые компоненты могут не выявляться в воротах первоначальной инфекции. Заболевание приобретает системный характер (рис. 3).
Рис. 3. Системное распределение возбудителей.
Сами хламидии — слабые иммуногены, поэтому титры антител при хламидиозах относительно невысоки. О сроках появления антител к основным белкам хламидий известно пока очень мало. В промежутке между 1-й и 3-й неделями после проявления первых симптомов болезни последовательно возникают родоспецифические антитела М, A, G, а в ряде случаев их удается определить в этот период одновременно.
IgM антитела в сыворотке пациентов являются ранним маркером инфекции, появляются первыми при иммунологическом ответе макроорганизма, инфицированного хламидиями. Антитела IgM определяются уже через 5 дней после начала заболевания. Наличие специфических IgM свидетельствует о развитии острой фазы хламидийной инфекции. Основное количество IgM сосредоточено в сосудистом русле. Период полураспада составляет 5 дней. Они нарабатываются против специфического хламидийного липополисахарида как наиболее сильного антигенного раздражителя иммунной системы, обладающего родоспецифическими функциями и стимулирующего антителогенез уже на ранней стадии инфицирования организма человека. Пик IgM приходится на 1-2-ю неделю. Затем происходит снижение титра антител. Как правило, IgM полностью исчезают через 2-3 месяца независимо от проведенного лечения. Эти антитела присутствуют только при острой фазе заболевания и не определяются при реинфекции. IgM оказывают стимулирующее влияние на синтез IgG. Антитела данного класса в ряде случаев могут не выявляться у подростков и взрослых при острой реинфекции (предыдущее инфицирование С. trachomatis или другими видами хламидий (С. pneumonia)). Выявление IgM к С. trachomatis является одним из основных серологических тестов для диагностики хламидийных пневмоний у новорожденных детей, а также у пациентов с LGV (венерической лимфогранулемой).
IgA существуют в сывороточной и секреторной формах. Первая защитная реакция организма на инфекцию состоит в индукции секреторного IgA в местах проникновения инфекции. Вначале этот класс антител можно детектировать в семинальной и вагинальной жидкостях [23], в то же время отсутствует корреляция с содержанием сывороточного IgA [29]. В сыворотке антитела появляются через 10-14 дней после начала заболевания, обычно параллельно появлению G-антител, только на более низком уровне титров, и свидетельствуют о прогрессировании заболевания. Уровень IgA-антител обычно снижается к 2-4-му месяцу в результате успешного лечения. При реинфекциях их уровень вновь возрастает. Если уровень IgA не падает после проведенного лечения, то это указывает на неэффективность лечения и формирование хронической формы инфекции. Таким образом, в диагностике хламидийной инфекции очень важно определение IgA-антител, так как они являются маркером как острой формы, так и манифестации при хронической форме инфекции. Наличие IgA свидетельствует об активации хламидийной инфекции. В течение короткого периода могут быть параллельно представлены IgM и IgA антитела. Определение специфических IgA более информативно в качестве маркера активной стадии хламидийной инфекции или в мониторинге эффективности лечения, так как эти антитела короткоживущие (5-8 дней) и имеют небольшой период полураспада. В это же время или с небольшой задержкой могут быть определены антитела класса IgG.
IgG — доминирующий класс иммуноглобулинов в сыворотке крови, составляющий до 90% всех антител. Около 48% его количества находится вне кровеносного русла, проходит через плацентарный барьер. Период полураспада — 23 дня. Аффинитет IgG к антигенным детерминантам хламидий повышается по мере развития иммунного ответа. IgG-антитела определяются через 15-20 дней после начала заболевания. Их наличие отражает более общую картину позитивного иммунного ответа в случаях текущей, хронической или перенесенной инфекции. В последнем случае IgG могут определяться на низком уровне в течение многих лет. В случае если происходит реинфекция или реактивация, наблюдается заметное увеличение уровня IgG (бустер-эффект), который у нелеченных пациентов сохраняется на неизменном уровне. Высокие уровни антихламидийных IgG диагностически важны при хронических или системных инфекциях: сальпингиты, механическая инфертильность, перигепатиты, эпидимиты, синдром Рейтера и пневмонии.
Хроническое течение хламидийной инфекции характеризуется наличием в крови пациентов IgA и IgG, уровни которых меняются незначительно в противоположность острой инфекции. Иногда при таком течении инфекции в течение 1-2 недель могут регистрироваться единичные IgA при недетектируемом уровне IgG. Обнаружение невысоких постоянных уровней lgA-антител в течение длительного периода времени может свидетельствовать о персистенции возбудителя при полном отсутствии симптоматики у пациентов. При лечении осложнений, вызванных восходящей хламидийной инфекцией, определение IgA и IgG может обеспечивать контроль излеченности пациентов [32]. Выявление 2-3-кратного снижения уровня А и/или G антител при исследовании в парных сыворотках может свидетельствовать об успешно проведенной терапии. Использование в серодиагностике парных сывороток, полученных на разных стадиях инфекции, может быть полезным, так как 2-4-кратная сероконверсия (увеличение титра антител во второй сыворотке по сравнению с первоначальной), свидетельствует об активной инфекции.
Динамика распределения видоспецифических антител к С. trachomatis в различных группах населения представлена в таблице 2.
Таблица 2. Мониторинг и распределение IgG и IgA к С. trachomatis в различных группах населения
Иммуноферментный анализ в серодиагностике хламидиозов
При серодиагностике хламидиозов используют следующие методы: реакция связывания комплемента (РСК), реакция непрямой гемагглютинации (РНГА), реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) или микроиммунофлюоресценции (MIF-test), непрямой иммунопероксидазный анализ (IРА). Описание данных методов приведено в многочисленных зарубежных и отечественных публикациях.
Для серодиагностики хламидийных инфекций используют коммерческие ИФА-тест-системы, позволяющие выявлять родоспецифические или видоспецифические антитела различных классов. Иммуноферментные тест-системы, предназначенные для выявления родоспецифических антител, позволяют обнаруживать антитела классов IgM, IgA, IgG ко всем хламидиям. Тест-системы, сконструированные на основе видоспецифических белков или эпитопов С. trachomatis, позволяют определять видоспецифические антитела. В качестве антигенов для иммобилизации иммунологических планшетов при постановке ИФА на выявление родоспецифических антител к хламидиям используют очищенные лизаты клеток хламидий, наиболее часто из С. psittaci, или более высокоспецифичный рекомбинантный фрагмент хламидийного липополисахарида, не дающий перекреста с липосахаридами других грамотрицательных бактерий. В связи с этим тест-системы, основанные на использовании родоспецифического антигена хламидий, не дают информацию о том, каким видом хламидий вызвана инфекция, т. к. между различными видами могут наблюдаться перекрестные реакции. Известно, что более 70% населения имеют антитела к хламидиям, при этом большая доля (до 60-80%) людей имеют антитела к С. pneumonia (без клинической симптоматики), тогда как средние значения содержания антител к С. trachomatis составляют в популяции около 21%, сильно варьируя в различных группах населения [17].
В связи с этим при уточнении диагноза необходимо проводить межвидовую дифференцировку между С. trachomatis и С. pneumonia. Для дифференцировки между С. pneumonia и С. trachomatis требуются тесты, направленные на определение видоспецифических антител к тому или иному виду хламидий. При производстве видоспецифических тест-систем в качестве антигенов используют синтетические иммунодоминантные пептиды, соответствующие различным серотипам, которые не имеют гомологии с другими видами хламидий; рекомбинантные белки или очищенные элементарные тельца, специфичные для определенного вида хламидий.
Современные зарубежные тест-системы для определения видоспецифических антител к С. trachomatis разработаны на основе синтетических пептидов, являющихся зеркальным отражением видоспецифических иммунодоминантных эпитопов МОМР-белка, что исключает возможность перекреста с другими видами хламидий (рис. 4).
Рис. 4. Структура клеточной стенки хламидии.
Использование синтетических пептидов иммунодоминантных эпитопов МОМР-белка (основной белок наружной мембраны) в качестве антигенов в ИФА позволило существенно повысить чувствительность и специфичность разработанных коммерческих ИФА-тест-систем (фирм “Лаб-системc”, Финляндия; “Savyon Diagnostics Ltd”, Израиль; “Меdac”, Германия; “Meiji Milk Products Co., Ltd”, Япония) [18, 19]. При исследовании сывороток в данных тест-системах отсутствует перекрест с антителам и к С. pneumonia. Это особенно важно, т. к. с возрастом у абсолютного большинства людей выявляются антитела к С. pneumonia [36] в различных титрах, при этом отсутствуют клинические проявления. Использование иммуноферментных методов диагностики имеет большую ценность при установлении окончательного диагноза. Для выявления антител к С. trachomatis необходимо проводить определение IgA и IgG одновременно. При неясном результате IgA подтверждение осуществляется определением IgM. Определение только IgM недостаточно, так как отсутствие этого класса антител еще не говорит об отсутствии заболевания. Острой формы заболевания нет, но может быть хроническая.
Необходимо отметить, что ведущие зарубежные производители иммуноферментных тест-систем для серодиагностики хламидий не выпускают видоспецифические иммуноферментные тест-системы для выявления антител класса М к C.trachomtis. Работа по созданию таких ИФА-тест-систем проводится [29], но наталкивается на ряд проблем. Циркулирующий ревматоидный фактор (IgM анти IgG) обуславливает ложноположительные результаты. Кроме того, присутствие в сыворотках чрезмерных количеств специфических IgG может приводить к конкуренции с IgM за определенные антигенные эпитопы и быть причиной ложнонегативных результатов. Антитела данного класса в ряде случаев могут не выявляться у подростков и взрослых при острой инфекции из-за предыдущего инфицирования С. trachomatis или другими видами хламидий (С. pneumonia).
В то же время выявление IgM к С. trachomatis является одним из основных серологических тестов для диагностики хламидийных пневмоний у новорожденных детей, а также у пациентов с LGV (венерической лимфогранулемой). Наиболее часто в таких случаях используют флуоресцентный метод определения видоспецифических антител данного класса или родоспецифический ELISA-тестдля обнаружения IgM.
Иммуноферментная тест-система для выявления видоспецифических
IgG к С. trachomatis “Хлами-IgG-ДС-Тг”
ЗАО “Медико-биологический союз” (МБС) совместно с НИКТИ БАВ ГНЦ ВБ “Вектор”, 000 “Агробиомед” впервые в России разработали коммерческую тест-систему для выявления видоспецифических иммуноглобулинов G к С. trachomatis в сыворотке крови человека методом ИФА.
В процессе разработки тест-системы была проведена сравнительная оценка различных антигенов С. trachomatis отечественного производства. Показана перспективность применения в качестве сенсибилизирующего антигена для иммунологических планшетов видоспецифического рекомбинантного белка С. trachomatis (С-концевой фрагмент МОМР-белка С. trachomatis). Использование высокоочищенного видоспецифического рекомбинантного антигена позволило создать тест-систему “Хлами-IgG-ДС-Тг”, обладающую высокой чувствительностью и специфичностью. Показано отсутствие перекрестных реакций с антителами к С. psittaci и С. pneumonia.
Тест-система была аттестована в контролированном шифрованном клиническом опыте, проведенном сотрудниками ГИСК им. Л. А. Тарасевича на 180 сыворотках, полученных от больных с различными поражениями внутренних органов и мочеполовой системы хламидийной этиологии, от больных людей с различными поражениями внутренних органов и мочеполовой системы нехламидийной этиологии (пневмонии, бронхиты, ОРЗ, артриты, гепатиты В и С, нефриты, урогенитальные инфекции) и от здоровых людей без клинических жалоб.
Таблица 3. Результаты испытаний чувствительности и специфичности иммуноферментной тест-системы “Хлами-IgG-ДС-Tr” в сравнении с референс-тест-системой.